全基因组规模基因敲除gRNA文库（GeCKO v2.0）
BET9登录网址提供专利引进于Broad研究所张峰实验室的 ，能实现Human和Mouse细胞基因组规模CRISPR敲除的gRNA文库（GeCKO ） ，能够在Human或Mouse细胞中快速爆发功效缺失的突变体并且筛选所期望的表型。运用GeCKO文库可以在人或小鼠的基因组内敲除任何表达基因及miRNA等非表达的基因。GeCKO文库允许客户在差别的条件下判断任何细胞功效必需的基因 ，筛选何种基因的缺失会使癌细胞具有耐药性。GeCKO文库已经被普遍使用于原代的人或小鼠细胞 ，干细胞 ，癌细胞及种种稳固细胞系。GeCKO v2.0作为升级版的GeCKO文库 ，加入非靶向gRNA作为比照 ，同时用于转导的慢病毒载体也同步举行了升级 ，以便更高效的富集病毒和提升病毒在原代细胞的转染效率。
GeCKO v2.0文库针对每个基因设计了6条gRNA序列 ，但为了降低后续转染和筛选事情量的压力将GeCKO v2.0文库分成两个文库 ，文库A和文库B。每个文库包括针对每个基因的3个gRNA ，以及1,000个非靶向的比照性gRNA。A文库还包括针对miRNA的gRNA（每个miRNA有4个gRNA）。为了确保针对每个基因的gRNA的完整表达 ，可以同时购置A文库和B文库混淆后使用 ；但若是细胞样品和后续高通量筛能力有限 ，建议可以仅使用文库A举行筛选。
更多GeCKO文库设计、构建信息 ，请参考张峰实验室揭晓的文献：Sanjana N.E. ，Shalem O. ，Zhang F. Improved vectors and genome-wide libraries for CRISPR screening. Nat Methods. 2014 Aug ；11(8)：783-4. doi：10.1038/nmeth.3047.
文库信息
| 文库 |
序列信息 |
| Human Library A |
65,383 sequences：
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靶向19,050个基因 ，每3条gRNA靶向1个基因 ；
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1,864个miRNA ，每4条gRNA靶向1个miRNA ；
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1000条比照（非靶向性）gRNA。
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| Human Library B |
58,028 sequences：
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靶向19,050个基因 ，每3条gRNA靶向1个基因 ；
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1000条比照（非靶向性）gRNA。
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| Mouse Library A |
67,405 sequences：
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靶向20,611个基因 ，每3条gRNA靶向1个基因 ；
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1,175个miRNA ，每4条gRNA靶向1个miRNA ；
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1000条比照（非靶向性）gRNA。
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| Mouse Library B |
62,804 sequences：
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靶向20,611个基因 ，每3条gRNA靶向1个基因 ；
-
1000条比照（非靶向性）gRNA。
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BET9登录网址GeCKO v2.0文库交付形式和使用要领
GeCKO v2.0文库中每一个gRNA都被克隆进优化的慢病毒载体 ，与辅助细胞共转染293细胞后可形成高滴度的病毒 ，最终gRNA序列可在目的细胞中实现高效转录。
完成病毒包装的GeCKO v2.0文库应与目的细胞举行较低的MOI举行转染 ，以确保进入单个细胞的gRNA数目不凌驾1个。在完成转染后 ，最先筛选事情之前 ，应举行一轮NGS深度测序 ，评估细胞池中gRNA的表达情形。在筛选竣事后再举行第二轮NGS深度测序 ，并对数据举行剖析, 确定筛选历程中丧失或富集的gRNA序列。
Julia Joung et.al. Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening. Nat Protoc. 2017 Apr;12(4):828-863
GeCKO文库交付规格
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文库（转染级）以25μg为一个单位量。100μg及200μg文库划分是以4x25μg或者8x25μg形式交付。
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提供项目报告及二代测序验证的统计摘要及COA文件 ，如您需要 ，还可提供完整可用的NGS原始数据。
