产品特点

笼罩多种AAV血清型滴度检测

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BET9登录网址L01035可检测包括但不限于：AAV1/2/5/6/8/9等血清型
。

试剂盒质料自产

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抗体质料/标准品可确保高纯度、高特异性、一致性和高稳固性
。

试剂盒性能佳

---

线性规模宽/细密度高/准确度高
。

极短检测时间

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检测时长约2.5小时
。

产品列表

检测原理

• AAV滴度衣壳卵白ELISA试剂盒

  BET9登录网址AAV滴度衣壳卵白ELISA试剂盒均是使用了两种抗AAV衣壳卵白的单克隆抗体，它们可与衣壳卵白的差别表位团结
  。当标准品或样品加入捕获板时，AAV衣壳卵白可以被包被在捕获板上的捕获抗体捕获，之后在系统中加入与生物素偶联的检测抗体，该检测抗体可以与捕获板上团结的衣壳卵白相互作用
  。随后添加可与生物素偶联的检测抗体相互作用的Streptavidin-HRP，经洗涤加入TMB和终止溶液，最后使用酶标仪读取OD450 nm
  。测试样品中衣壳卵白的浓度可凭证衣壳卵白标准曲线实现准确定量
  。

  

  图1：AAV滴度衣壳卵白ELISA试剂盒检测原理

验证数据

• 稀释线性

  表1a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes
  （GenScript, L01035）稀释线性验证

  Sample No.	Dilution Factor	Measured Conc. (Capsids/mL)	CV
  Sample A	36	2.11E+11	3%
  	72	2.18E+11
  	144	2.10E+11
  	288	2.26E+11
  Sample B	60	2.29E+11	8%
  	120	2.55E+11
  	240	2.74E+11
  	480	2.73E+11
  Sample C	50	1.10E+11	9%
  	100	1.31E+11
  	200	1.33E+11
  	400	1.19E+11
  Sample D	60	1.03E+11	9%
  	120	1.12E+11
  	240	9.39E+10
  	480	5.99E+10
  Sample E	50	9.78E+10	3%
  	100	1.03E+11
  	200	9.87E+10
  	400	5.94E+10

  表1b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）
  稀释线性验证

  Sample No.	Dilution Factor	Measured Conc. (Capsids/mL)	CV
  Sample 1	120	1.26E+11	6%
  	240	1.31E+11
  	480	1.20E+11
  	960	1.39E+11
  Sample 2	130	1.37E+11	4%
  	260	1.38E+11
  	520	1.28E+11
  	1040	1.41E+11
  Sample 3	110	1.02E+11	8%
  	220	1.08E+11
  	440	1.03E+11
  	880	1.20E+11
  Sample 4	130	2.70E+11	5%
  	260	2.76E+11
  	520	2.65E+11
  	1040	2.98E+11
  Sample 5	80	2.00E+11	5%
  	160	2.19E+11
  	320	2.20E+11
  	640	2.24E+11

  对样本举行差别倍数的稀释，使用AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035），AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）剖析稀释线性，效果显示统一样本，差别的稀释倍数回算的样本浓度CV＜10%，稀释误差以及受样本基质影响小
  。

• 细密度

  表2a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes 重复性评估

  Batch No.	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  #1	10	4.03E+08	4%	4.00E+08	101%
  	10	1.24E+09	3%	1.20E+09	103%
  	10	4.70E+09	2%	5.00E+09	94%
  #2	10	4.32E+08	4%	4.00E+08	108%
  	10	1.28E+09	6%	1.20E+09	107%
  	10	4.58E+09	6%	5.00E+09	92%
  #3	10	3.94E+08	6%	4.00E+08	99%
  	10	1.24E+09	8%	1.20E+09	103%
  	10	4.50E+09	6%	5.00E+09	90%

  表2b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit 重复性评估

  Batch No.	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  #1	10	1.92E+08	6%	1.80E+08	107%
  	10	4.98E+08	7%	5.00E+08	100%
  	10	1.95E+09	2%	2.00E+09	98%
  #2	10	1.83E+08	5%	1.80E+08	102%
  	10	4.85E+08	4%	5.00E+08	97%
  	10	1.95E+09	6%	2.00E+09	98%
  #3	10	1.79E+08	6%	1.80E+08	99%
  	10	4.69E+08	5%	5.00E+08	94%
  	10	1.94E+09	6%	2.00E+09	97%

  表3a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes 三批次批间差评估

  Batch Amount	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  3	3×10	4.09E+08	6%	4.00E+08	102%
  	3×10	1.26E+09	6%	1.20E+09	105%
  	3×10	4.59E+09	5%	5.00E+09	92%

  表3b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit 三批次批间差评估

  Batch Amount	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  3	3×10	1.47E+08	9%	1.80E+08	82%
  	3×10	4.83E+08	5%	5.00E+08	97%
  	3×10	1.88E+09	6%	2.00E+09	94%

  使用三批次试剂盒划分对3个浓度水平的样本举行测试，每个样本各重复检测10次
  。以此剖析AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）和AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）的批内细密度和批间细密度
  。效果显示，L01035和L00942的细密度CV<10%
  。< /p>

• 接纳率

  表4a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）添加接纳验证

  Spiked Conc. (Capsids/mL)	Batch No.	Recovery Rate
  1.50E+08	#1	98%
  	#2	109%
  	#3	94%

  表4b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）
  添加接纳验证

  Spiked Conc. (Capsids/mL)	Batch No.	Recovery Rate
  2.00E+08	#1	100%
  	#2	103%
  	#3	93%

  使用三批次试剂盒划分对加标剖析物举行测试，以此剖析AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）和AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）的添加接纳率
  。效果显示，L01035和L00942的接纳率均在80%-120%规模内
  。

• L01035和L00942检测相关性
  

  图2：使用AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（货号：L01035）通用型检测试剂盒与AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（货号：L00942）单血清型检测试剂盒，检测6例相同的AAV2样本，相关性R?=0.9971
  。

• AAV2.7m8 样本检测案例
  

  图3： BET9登录网址的AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）以及AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）均可以对刷新的AAV2.7m8举行检测
  。

• L01035 对差别血清型的检测规模

  表5：差别 AAV 血清型滴度测定的典范测定事情规模

  Serotype	Typical assay working ranges (Capsids/mL)
  AAV1	2.73E+07 - 1.75E+09
  AAV2	1.32E+08 - 7.00E+09
  AAV5	6.30E+07 - 4.00E+09
  AAV6	3.91E+07 - 2.50E+09
  AAV8	6.27E+07 - 4.00E+09
  AAV9	1.09E+08 - 7.00E+09

  *表中各血清型事情规模验证选择的质料，AAV2为BET9登录网址自产的VLP（Virus-like particle），其余均为来自于Progen的Empty capsids
  。

  

  图4： 差别AAV血清型滴度测定标准曲线的叠加图
  AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（货号：L01035）中的抗体质料对差别血清型的 AAV 的识别情形差别，因此在检测差别血清型时，检测事情规模会有所差别
  。

• L00942 的检测特异性
  

  图5： 使用AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）检测AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV8、AAV9样本，能够仅特异性检测AAV2样本，且不与其他测试样本爆发交织反应
  。

常见问题解答

• 1. 试剂盒中是否提供阳性标准品？

  AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）提供AAV2标准品，该标准品为BET9登录网址自产的VLP（Virus-like particle）
  。
  AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（货号：L01035）仅提供AAV2标准品，不提供其他血清型的标准品
  。其他血清型的标准品需要用户自行建设
  。

• 2. 若是没有其他血清型的AAV阳性标准品，是否可以使用AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes？

  建议使用与样品中 AAV 衣壳相匹配的阳性标准品，以天生准确的定量标准曲线
  。
  若用户无法获取AAV其他血清型标准品，推荐使用下方换算公式，纵然用本试剂盒中的AAV2标准品建设标准曲线并测定样本的浓度，再将测定浓度作为X带入公式盘算出对应血清型的滴度
  。表格中的公式已举行相关性验证（该要领仅限简陋盘算）
  。

  Serotype	Typical assay working ranges (Capsids/mL)
  AAV1	y = 0.2498x - 3E+07
  AAV5	y = 0.8306x - 2E+07
  AAV6	y = 0.3759x - 3E+07
  AAV8	y = 0.5314x - 4E+06
  AAV9	y = 0.4569x + 9E+07

• 3. AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes对差别AAV血清型的检测规模
  。

  本试剂盒已验证关于AAV 血清型 1、2、5、6、8、9的适用性，典范的事情规模可见下表：

  Serotype	Typical assay working ranges (Capsids/mL)
  AAV1	2.73E+07 - 1.75E+09
  AAV2	1.32E+08 - 7.00E+09?
  AAV5	6.30E+07 - 4.00E+09
  AAV6	3.91E+07 - 2.50E+09
  AAV8	6.27E+07 - 4.00E+09
  AAV9	1.09E+08 - 7.00E+09

  *表中各血清型事情规模验证选择的质料，AAV2为BET9登录网址自产的VLP（Virus-like particle），其余均为来自于Progen的Empty capsids
  。

  本试剂盒中的抗体质料还可识别AAV2.7m8，AAVDJ 和 AAVrh.1，但本试剂盒未对这三种血清型举行验证
  。关于其他的 AAV 血清型，本试剂盒未举行验证，但并纷歧定意味着它们无法被检测到
  。用户可以凭证该试剂盒的计划来评估本品对其他血清型的适用性
  。

• 4. 一个试剂盒可以检测几多个样本？

  试剂盒中各配有一块预包被的96孔酶标板，其中包括8 孔 x 12 板条，我们建议凭听说明书中推荐的标准曲线稀释梯度，设置8个标准品事情液
  。 为了确保滴度的可靠定量，建议标准品和样品均一式两份举行重复测试
  。由此可盘算出，一旦应用了标准曲线，就可以获得40个重复的丈量值
  。

• 5. 是否可以提供特另外洗液试剂？

  可单独选购 20× Wash Solution (GenScript, B00063)，该洗液适用于本试剂盒
  。

• 6. 测值凌驾线性规模是否有用？

  无效
  。需要调解稀释倍数重新复测
  。

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