案例1. 慢病毒熏染实验
第二代病毒系统
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第三代病毒系统
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第三代病毒系统
其它公司
划分使用BET9登录网址优化的三代病毒包装系统,二代病毒包装系统以及其他公司的包装系统举行EGFP慢病毒包装,测定滴度后调解成相同的MOI去熏染等量的293T细胞,熏染后72小时举行荧光照相。升级后的BET9登录网址三代系统熏染效率最高。
案例2. GFP病毒熏染Jurkat MOI测试
MOI | GFP% | 熏染时间 |
---|---|---|
10 | 17.1% | 72h |
20 | 26.1% | 72h |
40 | 41.6% | 72h |
80 | 60.1% | 72h |
注:Jurkat细胞是一种难转导的T淋巴细胞。使用BET9登录网址第三代质粒系统包装GFP病毒熏染Jurkat细胞,经由测试,在MOI=80时,熏染率抵达60.1%。
案例3. GFP病毒熏染BaF3测试
MOI=500
MOI=1000
MOI=2000
BaF3(鼠源B淋巴细胞)是一种极难转染的细胞。使用BET9登录网址第三代质粒系统包装GFP病毒举行熏染实验。 在24孔板加入2x105细胞,3x108IFU/ml病毒(MOI划分设置为500/1000/2000)以及8μg/ml的polybrene,熏染24h后换液,48h后举行荧光照相。
效果显示,在MOI=500时,熏染效率凌驾80%。
案例4. BET9登录网址慢病毒包装系统基因承载长度测试
Gene name | Target gene length | Titer(x10^6IFU/ml) |
---|---|---|
Gene 1 | 3773 bps | 343.0155 |
Gene 2 | 4698 bps | 358.6088 |
Gene 3 | 5498 bps | 184.6572 |
Gene 4 | 6622 bps | 261.1701 |
注:一样平常情形下,目的基因长度凌驾3000bps就很难抵达高滴度水平,甚至无法包装。BET9登录网址的慢病毒包装系统最高可抵达6.6kb。关于通例基因,即GC含量适中,没有重大重复序列,不引起细胞致死等,5kb以内长度,BET9登录网址均可包管108IFU/ml的滴度。